發(fā)布時(shí)間： 2021-01-26 點(diǎn)擊次數(shù)： 756次
谷氨酸合成酶（GOGAT）試劑盒使用手冊(cè)
產(chǎn)說(shuō)明：
GOGAT 主要存在于原核生物、酵母菌及高等植物非綠色組織的質(zhì)體中，和谷氨酰胺合成酶（GS）共同構(gòu)成 GS/GOGAT 循環(huán)，參與氨同化的調(diào)控。GOGAT 以 NADH 為電子供體，催化谷氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸形成兩分子的谷氨酸，NADH 在 340nm 吸光度的下降速率可以反映 GOGAT 活性大小。
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
、粗酶液提取：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL
提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
二、測(cè)定步驟：
1、 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 工作液提配置，平衡至室溫。
3、 樣本測(cè)定
注意事項(xiàng)：
1、測(cè)定期間樣本在冰上放置，以免變性和失活。
2、好兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，個(gè)人比色，個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3、當(dāng) A1 大于 1.5 或者ΔA 大于 0.6 時(shí)，建議將樣用蒸餾水稀釋后測(cè)定，當(dāng)ΔA 過(guò)小時(shí)，可以延長(zhǎng)酶
促反應(yīng)時(shí)間（10min 或 15min）或者加大加入的樣體積進(jìn)行測(cè)量。
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