芽孢染色法的操作原理

芽孢是芽孢桿菌屬和梭菌屬生長到一定階段形成的一種抗逆性很強(qiáng)的休眠體結(jié)構(gòu)，通常為圓形或橢圓形。
 

芽孢壁厚、透性低，著色、脫色均較困難。因此，用著色力強(qiáng)的染色劑（如孔雀石綠）在加熱條件下進(jìn)行染色時(shí)，染料不僅可以進(jìn)入菌體，而且也可以進(jìn)入芽孢，進(jìn)入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色，而進(jìn)入芽孢的染色的染料則難以透出，若再用復(fù)染液（如沙黃水溶液）染色后，芽孢仍然保留初染劑的顏色，而菌體被染成復(fù)染劑的顏色，即菌體和芽孢分別染成紅色和綠色易于區(qū)分。

部分細(xì)菌能產(chǎn)生內(nèi)孢子，這些孢子能抵制細(xì)菌染色液的進(jìn)入，在微生物檢測(cè)革蘭氏染色法涂片染色時(shí)，革蘭氏陽性菌的芽孢呈現(xiàn)無色。雖然芽孢在革蘭氏染色片中可以看到，但在不易清晰觀察時(shí)，可用特殊的芽孢染色法，使芽孢與菌體呈現(xiàn)不同顏色，便于觀察。主要的芽孢染色法有孔雀綠染色法和石碳酸復(fù)紅染色法。

孔雀綠染色法的具體步驟：首先將生有芽孢的斜面菌苔按革蘭氏染色法涂片后，用飽和孔雀綠水溶液染色10min，然后用自來水沖洗，沖洗完后用0.5%蕃紅液復(fù)染30s，用水洗，吸干，即可鏡檢，鏡檢時(shí)芽孢呈綠色，菌體和芽孢囊呈微紅色。

石碳酸蕃紅染色法具體步驟：首先按常規(guī)涂片，然后滴加石碳酸復(fù)紅于涂片上，并于玻片下緩緩加熱，使染液冒蒸汽但不沸騰，并繼續(xù)滴加染液，不使涂片上染液蒸干，這樣保持5min。帶涂片冷卻后，傾去染液，用酸性乙醇脫色指無紅色染劑洗脫為止，接著*水洗，洗后用呂氏美藍(lán)復(fù)染2-3min，水洗吸干后即可進(jìn)行鏡檢，鏡檢時(shí)菌體計(jì)孢囊呈藍(lán)色，芽孢呈紅色。